Spektrofotometeret sender lys med én bølgelængde gennem en kuvette. Det sammenligner lyset, der kommer ud, med lyset, der går ind. Transmittansen T er den del af lyset, der slipper igennem. Absorbansen er A = −log(T).
Lambert-Beers lov
A = ε · l · c
ε er stoffets ekstinktionskoefficient ved bølgelængden, l er kuvettens bredde (her 1,00 cm), og c er koncentrationen. A er proportional med c.
Standardkurven
Nulstil med en blindprøve. Den indeholder alt undtagen det farvede stof.
Mål en række standarder med kendt koncentration. Punkterne ligger på en ret linje gennem (0, 0): A = a · c, hvor hældningen er a = ε · l.
Mål prøven. Find c ved at aflæse grafen eller ved at regne: c = A / a.
Er prøven fortyndet, regnes tilbage med cfør · Vfør = cefter · Vefter.
Man måler ved den bølgelængde, hvor stoffet opsuger mest. Et rødt farvestof opsuger grønt lys.
Nitrit
Nitrit, NO₂⁻, er farveløs. I sur opløsning reagerer den med sulfanilamid og danner en farveløs diazoniumion. Diazoniumionen reagerer med koblingsreagenset og danner et rødt azofarvestof, der måles ved 540 nm. Hver nitrition giver ét farvestofmolekyle, så standardkurven kan laves direkte med c(NO₂⁻).
To farvede stoffer
Absorbanserne lægges sammen: A = A1 + A2. Opsuger kun ét af stofferne ved en bølgelængde, kan dets koncentration findes direkte dér. Så kan dets bidrag ved den anden bølgelængde regnes ud og trækkes fra.
Enheden µM
1 µM = 10⁻⁶ mol/L. Hældningen a har enheden µM⁻¹, dvs. pr. µM.
123 fane · Enter tjek · R forfra · H rundvisning · T teori · Q quiz · Esc luk